Il fut un des élèves de Cypriano de Rore. En mai 1561, il devient organiste à la cour d’Este, et premier organiste en 1564 après la mort de Jacques Brunel.
Avant 1570, il participe à la musique de chambre du duc Alfonso. Il compose pour le célèbre Concerto della done, ensemble féminin fondé en 1580 par Alfonso II, duc de Ferrare, qui tenait à garder son répertoire secret. Très virtuose, spécialisé dans le madrigal, l’ensemble disparaît en 1597, à la dissolution de la cour. Des chanteuses comme Lucrezia Bendidio, Tarquinia Molza et Laura Peverara, étaient connues dans toute l’Italie. Des madrigaux « secrets » de Luzzaschi sont publiés en 1601.
Il semble qu’il seconde, avec autorité, Ippolito Fiorini, le maître de chapelle de la cour, où l’activité musicale est intense.
Il est également organiste à la cathédrale de Ferrare, et à l’Académia della Morte.
Après la mort d’Alfonso II en 1597, et l’extinction de la lignée, le pape Clément VIII, ne reconnaît pas la succession de Cesare d’Este, appuyée par l’empereur Rudolph II. Ferrare est annexée aux États papaux.
Luzzaschi est en relation avec le cardinal Pietro Aldobrandini, gouverneur papal, en charge de Ferrare. Il séjourne à sa cour lors d’un visite à Rome en 1601.
Entre 1599 et 1601, il envoie des compositions au cardinal Federico Borromeo, mais il ne semble pas qu’il ait séjourné à Milan.
Il tient une place importante dans le mouvement dit seconda pratica, illustré par Monteverdi, dans l’épanouissement du madrigal, et par la fait qu’il eut de nombreux élèves dont Girolamo Frescobaldi.
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