Née à Fontainebleau elle se marie à Paris le 22 juin 1559 avec Philippe II, Roi d’Espagne. Elle fut surnommée "Isabelle de la paix" par les espagnols. Elle est la filleule d’Henri VIII, roi d’Angleterre.
Elle décède à Madrid en 1568 lors de l’accouchement de son 3ème enfant.